毛細(xì)管色譜柱安裝步驟：
1. 檢查氣體過濾器、載氣、進(jìn)樣墊和襯管等；
2. 將螺母和卡套裝在柱上，并將色譜柱兩端口小心切平；
3. 將色譜柱連于進(jìn)樣口上；
4. 接通載氣；
5. 將色譜柱連于檢測器上；
6. 進(jìn)行氣體檢漏；
7. 確定載氣流量，再對(duì)色譜柱的安裝進(jìn)行檢查；
8. 色譜柱的老化；
9. 設(shè)置確認(rèn)載氣流速；
10. 柱流失檢測；
11. 分析測試實(shí)驗(yàn)混合樣品。

需要的安裝工具和附件：
1. 切割工具如金鋼石頭或碳頭筆、寶石頭筆或瓷楔；
2. 放大鏡（10-20 X）；
3. 標(biāo)尺；
4. 扳手；
5. 卡套；
6. 溶劑瓶；
7. 干凈的注射針；
8. 適用的非柱保留化合物樣品；
9. 色譜柱測試混合樣品；
10. 流量計(jì)；
11. 其他附件：進(jìn)樣墊、干凈的襯管、襯管卡套/O 形環(huán)等。

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步驟1 ：檢查氣體過濾器、載氣、進(jìn)樣墊和襯管等
? ? ? ? 檢查進(jìn)樣墊和氣體過濾器，保證輔助氣和檢測器用氣通暢有效。如果以前做過較臟樣品或活性較高的化合物，需要將進(jìn)樣口襯管清洗或更換。

步驟2 ：將螺母和卡套裝在柱上，小心切平柱子兩端口
? ? ? ? 在色譜柱的一端裝上相應(yīng)的螺母和卡套，此時(shí)色譜柱端口無前后之分；色譜柱支架的支撐部分應(yīng)總是朝向著柱箱門。安裝好螺母和卡套后，將色譜柱端口切平，并用放大鏡進(jìn)行檢查。

? ? ? ? ［熔融石英毛細(xì)管和切割］將色譜柱所要切割的部位用一根手指頂住，用適合的切割工具（見需要的安裝工具和附件列表）在外管壁輕輕地劃上一個(gè)標(biāo)記，不要直接進(jìn)行切割。然后捏住距標(biāo)記1-2cm 的兩處柱身，兩手同時(shí)向外拉并彎折柱身，使柱子在標(biāo)記處折斷。再使用放大鏡對(duì)切割后的端口進(jìn)行檢查，以確認(rèn)切口和管壁成直角，并且沒有殘留的碎屑，沒有毛邊或不平的切割面（見圖1）。如有問題，最好再切割一次。

圖1. 柱切口SEM 圖

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? ? ? ? ［卡套］常用的色譜柱卡套有兩種：石墨和石墨/Vespel。如果應(yīng)用的是ECD 或GC/MS 系統(tǒng)，不能使用石墨卡套。色譜柱的直徑?jīng)Q定所用卡套的內(nèi)徑（見表1）。使用不合適的卡套不僅難于安裝，而且很難保證連接處的密封性。注意：Agilent 的6890/5890 型GC所用的卡套比常規(guī)的要短。

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步驟3 ：將色譜柱連于進(jìn)樣口上
? ? ? ? 色譜柱在進(jìn)樣口中的嵌入濃度根據(jù)所使用的GC 不同而不同。正確合適的嵌入能最大可能地保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重現(xiàn)性。通常來說，色譜柱的頂端應(yīng)保持在進(jìn)樣口襯管的中下部，當(dāng)進(jìn)樣針穿過隔墊完全插入進(jìn)樣口后，如果針尖與襯管中的色譜柱頂端相差1-2 cm，這就是較為理想的狀態(tài)（具體的嵌入濃度和方法請(qǐng)參見所使用GC的隨機(jī)手冊(cè)）。

? ? ? ? 從色譜柱架上取出需要連接的足夠的長度，并按步驟2 切割柱子，連接到進(jìn)樣口。避免用力彎曲壓擠毛細(xì)柱，并小心不要讓標(biāo)記牌等有鋒利邊緣的物品與色譜柱接觸磨擦，以防柱身斷裂或受損。

? ? ? ? 連接螺母的安裝：將色譜柱正確地嵌入進(jìn)樣口后，用手把連接螺母擰上，擰緊后（用手?jǐn)Q不動(dòng)了）用扳手再多擰1/4-1/2 圈。如果色譜柱還有松動(dòng)，再擰1/4 圈，保證安裝的密封程度。因?yàn)椴痪o密和安裝，不僅會(huì)引起裝置的泄漏，而且有可能對(duì)色譜柱造成快速永久的損害。在螺母完全連接后，小心不要再將色譜柱上下移動(dòng)。

? ? ? ? 注意：如果在進(jìn)樣口或檢測器有一定溫度時(shí)安裝色譜柱，安裝效果可能會(huì)更好。因?yàn)榭ㄌ祝貏e是那些材質(zhì)為石墨/Vespel 的，在一定溫度下會(huì)軟化，易變形，也就更容易封住所要密封的部位。色譜柱裝好后，等進(jìn)樣口或檢測器的溫度降下來，再安裝其他部件。

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步驟4 ：接通載氣
? ? ? ? 當(dāng)色譜柱與進(jìn)樣口連接好后，接通載氣。調(diào)節(jié)柱前壓力以得到合適的載氣流速（見表2）。在色譜柱的另一端（空端），插入裝有己烷的樣品瓶中，正常情況下，我們可以看見瓶中穩(wěn)定持續(xù)的氣泡。如果沒有氣泡，就要重新檢查一下載氣裝置和流量控制器等是否安裝完全或設(shè)置正確，并檢測一下整個(gè)氣路有無泄漏。等所有問題解決后，將色譜柱端口從瓶中取出，擦拭干凈，保證柱端口無溶劑殘留，再進(jìn)行下一步安裝。

? ? ? ? 警告：當(dāng)空氣中氫氣的含量在4-10％時(shí)，這樣的混合氣體就有爆炸的危險(xiǎn)。雖然氣體本身的擴(kuò)散會(huì)降低爆炸的可能，但還是有一定的危險(xiǎn)性。所以一定要保證實(shí)驗(yàn)室有良好的通風(fēng)系統(tǒng)，防止氫氣過分的聚集。

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步驟5 ：將色譜柱連于檢測器上
? ? ? ? 其安裝和所需注意的事項(xiàng)與以上色譜柱與進(jìn)樣口聯(lián)接（步驟3）部分所講述的大致相同。如果在應(yīng)用中系統(tǒng)所使用的是ECD 或是NPD 等，那么在老化色譜柱時(shí)，使它不與檢測器相接，那么這一類的檢測器可能會(huì)更快地達(dá)到穩(wěn)定。關(guān)于色譜柱老化請(qǐng)見步驟8 中的內(nèi)容。

步驟6 ：進(jìn)行氣體檢漏
? ? ? ? 在色譜柱加熱前，一定要對(duì)GC 系統(tǒng)進(jìn)行檢漏。當(dāng)我們對(duì)進(jìn)樣口和檢測器進(jìn)行載氣檢漏時(shí)，使用電子檢漏計(jì)是最為有效的方法之一。建議不要使用Snoop 等肥皂泡，它有可能由被檢測處進(jìn)入色譜柱和其它裝置中，從而對(duì)系統(tǒng)有所損害。而且不能使用Snoop 對(duì)正在加熱的進(jìn)樣口和檢測器裝置進(jìn)行檢漏。如果一定要用液體檢漏，建議使用50/50 的異丙醇/ 水的混合溶液。

步驟7 ：確定載氣流量，再對(duì)色譜柱的安裝進(jìn)行檢查
? ? ? ? 警告：如果不通入載氣就對(duì)色譜柱進(jìn)行加熱操作，就會(huì)快速并且永久性地?fù)p壞色譜柱。當(dāng)色譜柱安裝好后，再依照步驟4 對(duì)載氣流量進(jìn)行確認(rèn)，或者使用非保留化合物樣品進(jìn)行檢測，我們可以通過分析得到的樣品譜圖來確認(rèn)進(jìn)樣口和檢測器的安裝是否正確。表3 中列出了常用的非保留化合物樣品。

? ? ? ? 實(shí)驗(yàn)過程：如果使用分流/ 不分流進(jìn)樣口，將色譜柱的溫度保持在35-40oC，使用分流模式進(jìn)1-2μL 樣品。如果使用的是不分流大口徑進(jìn)樣口，由于樣品不被分流進(jìn)樣，進(jìn)樣前應(yīng)先對(duì)樣品進(jìn)行稀釋，以免得到飽和的平頭峰形。這樣，我們應(yīng)該得到一張峰形尖銳的譜圖，而使用不分流大口徑進(jìn)樣口，色譜峰可能會(huì)有輕微拖尾。如果得不到色譜圖，有可能是根本就沒有載氣通過系統(tǒng)。那就需檢查一下調(diào)節(jié)器、氣體附件和流量控制器的設(shè)置是否正確。當(dāng)然也可能是檢測器、記錄儀和注射針等出了問題。如果色譜峰有明顯的拖尾現(xiàn)象，可能是進(jìn)樣口有泄露，或是色譜柱安裝不完整，也有可能是分流比設(shè)置得太低等。我們需要重新對(duì)色譜柱進(jìn)行安裝并對(duì)進(jìn)樣口進(jìn)行檢漏。只有完全解決了這個(gè)問題，才能進(jìn)行下一步。

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步驟8 ：色譜柱的老化
? ? ? ? 色譜柱安裝和系統(tǒng)檢漏工作完成后，就可以對(duì)色譜柱進(jìn)行老化了。對(duì)色譜柱升至一恒定溫度，通常為其溫度上限。特殊情況下，可加熱至高于最高操作溫度10-20 oC 左右。但是一定不能超過色譜柱的溫度上限，那樣極易損壞色譜柱。升溫速度一定要快，不要將程序升溫的速度設(shè)定的太慢。當(dāng)達(dá)到老化溫度后，記錄并觀察基線。比例放大基線，以便容易觀察。初始階段，基線應(yīng)持續(xù)上升，在到達(dá)老化溫度后5-10 分鐘開始下降，并且會(huì)持續(xù)30-90 分鐘。當(dāng)達(dá)到一個(gè)固定的值后，基線就會(huì)穩(wěn)定下來。如果在2-3 小時(shí)后基線仍無法穩(wěn)定或在15-20 分鐘后仍無明顯的下降趨勢(shì)，那么有可能系統(tǒng)裝置有泄漏或污染。遇到這樣的情況，應(yīng)立即將柱溫降至40oC 以下，盡快地檢查系統(tǒng)并解決相相關(guān)的問題。如果還是繼續(xù)地老化，不僅對(duì)色譜柱有損害，而且始終得不到正常穩(wěn)定的基線。另外，老化的時(shí)間也不宜過長，不然會(huì)降低色譜柱的使用壽命。

? ? ? ? 一般來說，涂有極性固定相和較厚涂層的色譜柱老化時(shí)間較長，而弱極性固定相和較薄涂層的色譜柱所需時(shí)間較短。而PLOT 色譜柱的老化方法又各不相同，具體步驟請(qǐng)參閱隨柱子的操作說明書。

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? ? ? ? 如果在色譜柱沒有與檢測器連接就進(jìn)行老化，那么老化后，色譜柱末端部分可能已被破壞。要先把柱末端10-20 cm 部分截去，再將色譜柱連接到檢測器上。

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? ? ? ? 溫度限定是指色譜柱能夠正常使用的應(yīng)用溫度范圍。如果操作溫度低于色譜柱的溫度下限，那么分離效果和峰形都不會(huì)很理想。但這樣對(duì)色譜柱本身并無什么損害。

? ? ? ? 溫度上限通常有兩個(gè)數(shù)值。數(shù)值較低的是恒溫極限。在此溫度下，色譜柱可以正常使用，而且無具體的持續(xù)時(shí)間限制。較高的數(shù)值是程序升溫的升溫極限。該溫度的持續(xù)時(shí)間通常不多于十分鐘。高于溫度上限的操作則會(huì)降低色譜柱的使用壽命。

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步驟9 ：設(shè)置確認(rèn)載氣流速
? ? ? ? 對(duì)于毛細(xì)管色譜柱，載氣的種類首選高純度氦氣或氫氣。建議不要使用氮?dú)庾鲚d氣。載氣的純度最好大于99.995％，而其中的氧氣含量越少越好。通常載氣級(jí)或超高純度氦氣和氫氣中氧氣的含量小于2ppm。

? ? ? ? 如果您使用的是毛細(xì)管色譜柱，那么依照載氣的平均線速度（載氣流動(dòng)的速度cm/sec）而不是利用載氣流速（載氣流量mL/min）來對(duì)載氣作出評(píng)價(jià)，這樣不僅簡單而且非常方便。因?yàn)橹У挠?jì)算采用的是載氣的平均線速度，而不是體積流速。我們進(jìn)一針非保留樣品（見表3），確定它的保留時(shí)間。然后按下列公式計(jì)算平均線速度（V）
V =L/tr
V = 平均線速度（cm/sec）
L = 色譜柱長度（cm）
tr = 非保留樣品色譜峰的保留時(shí)間（sec）
推薦平均線速度值: He, 30-40 cm/sec; H2, 50-80 cm/sec

? ? ? ? 不要使用色譜儀上的流量計(jì)去設(shè)置載氣流速，可能不準(zhǔn)。表4中列出了非保留樣品色譜峰的保留時(shí)間和對(duì)應(yīng)的流速范圍。大多數(shù)情況下，采用流速范圍的中間值較為適合。載氣速度（流速）會(huì)隨著柱溫的改變而改變，請(qǐng)?jiān)跍囟群愣ǖ那闆r下測量其具體數(shù)值。

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? ? ? ? 載氣雜質(zhì)過濾器：在載氣的管線中加入氣體過濾裝置不僅可以延長色譜柱壽命，而且很大程度地降低了背景噪聲。參考下圖，建議最好安裝一個(gè)高容量氧氣過濾器或和一個(gè)可指示氧氣過濾器。而在氧氣過濾器前再安裝一個(gè)水分過濾器，不僅可以延長氧氣過濾器的使用壽命，而且可以降低背景噪聲。使用ECD 系統(tǒng)時(shí)，最好能在其輔助氣路中安裝一個(gè)氧氣過濾器。

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步驟10 ：柱流失檢測
? ? ? ? 在色譜柱老化過程結(jié)束后，利用程序升溫做一次空白試驗(yàn)（不進(jìn)樣）。一般是以10oC/min 從50oC 升至恒溫極限，達(dá)到恒溫極限后保持10 min。這樣我們就可以得到一張流失圖（見圖2）。我們可以看出到一定程度，基線會(huì)快速地上升。使用記錄裝置將基線記錄下來，并記錄下50oC 和恒溫極限時(shí)的信號(hào)值。這些數(shù)值可能對(duì)今后做對(duì)比試驗(yàn)和實(shí)驗(yàn)問題的解決有幫助。

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圖2. 柱流失圖

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? ? ? ? 在空白實(shí)驗(yàn)的色譜圖中，不應(yīng)該有色譜峰出現(xiàn)。如果出現(xiàn)了色譜峰，通常可能是從進(jìn)樣口部位來的污染物。如果在正常的使用狀態(tài)下，色譜柱的性能開始下降，基線的信號(hào)值將會(huì)增高。另外，如果在很低的溫度下，基線信號(hào)值明顯大于初始值（與最初使用得到的結(jié)果比較），那么最有可能的是色譜柱和GC 系統(tǒng)有污染。

步驟11 ：分析實(shí)驗(yàn)混合測試樣品
? ? ? ? 最后，我們利用對(duì)混合測試樣品的分析來確認(rèn)色譜柱的安裝和性能。建議使用我們提供的對(duì)色譜柱質(zhì)量檢定所提供的標(biāo)準(zhǔn)樣品。有時(shí)，對(duì)于一些比較特殊的分析，我們采用適合于鑒定系統(tǒng)性能的樣品進(jìn)行分析。每一根新色譜柱都帶有一張柱性能測試譜圖，在相同于圖中實(shí)驗(yàn)條件和測試樣品的情況下，我們應(yīng)該得到與標(biāo)準(zhǔn)測試相同或相近的譜圖。如果試驗(yàn)的重復(fù)性很差，有可能是色譜柱的安裝、實(shí)驗(yàn)的操作或儀器本身出現(xiàn)了音問題。那么在正式做其他樣品之前，要解決掉所有出現(xiàn)的問題。