2025-03-24
焦糖色中4-甲基咪唑的測定 SPE-GC 法
參考GB 1886.64-2015 《食品安全國家標準 食品添加劑 焦糖色》 中 A.5? 4-甲基咪唑的測定
焦糖色素亦稱焦糖，是一種在食品工業中應用范圍十分廣泛的天然著色劑，是食品添加劑的重要一員。焦糖色素廣泛用于醬油、食醋、料酒、醬鹵、腌制制品、烘制食品、糖果、藥品、碳酸飲料及非碳酸飲料等，并能有效提高產品品質。在工業生產中，直接用糖加工而成的焦糖色素不含有4-甲基咪唑，而當前國內外大部分廠家生產的焦糖色素普遍采用氨類化合物作為催化劑，或由糖、氨水及亞硝酸鹽在高壓高溫下生成，稱之為氨法焦糖色素，會在生產過程中產生一定劑量的副產物4-甲基咪唑，給人體健康帶來安全隱患。
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2025年食品安全監督抽檢實施細則，增加了食品添加劑焦糖色的監督抽檢，4-甲基咪唑做為焦糖色的重要檢驗項目，迪馬科技根據食品安全國家標準 GB 1886.64-2015 食品添加劑 焦糖色，附錄A.5 ?4-甲基咪唑的測定，建立了焦糖色中4-甲基咪唑的測定方法。選取市場常見的固體和液體焦糖色做為樣品進行方法驗證，使用成品ProElut??SLE 硅藻土固相支持液-液萃取柱進行樣品凈化，提高工作效率，根據樣品的性質及前處理情況，提供ProElut??SLE 20mL, max sample volume(Cat.#: 62506)和ProElut??SLE 10mL, max sample volume(Cat.#: 62505)，兩種萃取柱產品，客戶可根據實際情況進行選擇。同時采用DM-WAX 30m x 0.25mm x 0.25μm(Cat.#: 7521)極性氣相色譜柱進行分離檢測，優化了程序升溫條件，使每針的樣品及雜質均可充分的流出色譜柱，保證結果的穩定性及重現性。供廣大客戶參考！
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本方案適用于焦糖色中4-甲基咪唑的測定。
標準儲備溶液1000μg/mL (Cat.#: 48591)：精密稱取10mg 4-甲基咪唑于10mL容量瓶中，用丙酮溶解并定容至刻度。
3.1?液體焦糖色
3.1.1 取10g樣品于50mL塑料離心管中，加10mL 3mol/L氫氧化鈉溶液，劇烈振蕩混合1min，使樣品充分溶解，待凈化。
3.1.2 或取5g樣品于50mL塑料離心管中，加5mL 3mol/L氫氧化鈉溶液，劇烈振蕩混合1min，使樣品充分溶解，待凈化。
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3.2?固體焦糖色
3.2.1 取5g樣品于50mL塑料離心管中，加20mL 3mol/L氫氧化鈉溶液，劇烈振蕩混合1min，使樣品充分溶解，待凈化。
3.2.2 或取2.5g樣品于50mL塑料離心管中，加10mL 3mol/L氫氧化鈉溶液，劇烈振蕩混合1min，使樣品充分溶解，待凈化。
4.1 將ProElut??SLE 20mL, max sample volume(Cat.#: 62506)固相支持液-液萃取柱放置在SS Rack 6-Ports For ProElut??60mL Cartridge(Cat.#: 4802)萃取裝置下層，萃取柱下方連接流量控制針頭，將大體積儲液器(Cat.#: 4812)放置在萃取裝置上層，儲液器下方連接可以控制流速的考克(Cat.#: 4806)，關閉考克，備用。
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將待凈化液3.1.1或3.2.1全部轉移至萃取柱中，當待凈化液全部流入萃取柱中，開始計時，向上層儲液器中加入70mL二氯甲烷，向待凈化液已轉移后的50mL塑料離心管中加入30mL二氯甲烷，充分潤洗離心管。萃取柱中液體吸附10min后，將潤洗液倒入萃取柱，待篩板上方潤洗液即將流干時，打開上層儲液器的考克，使二氯甲烷流入萃取柱，二氯甲烷在萃取柱上始終保持較高位置，繼續向儲液器中加入200mL二氯甲烷。萃取柱下方使用500mL蒸餾瓶收集全部二氯甲烷洗脫液，待洗脫液流至近干時，將蒸餾瓶取出，在35℃水浴下減壓蒸餾至約1mL，用丙酮洗滌蒸餾瓶數次，洗滌液全部轉移至5mL容量瓶中，用丙酮定容至刻度，混勻，上機分析。
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4.2 將ProElut??SLE 10mL, max sample volume(Cat.#: 62505)固相支持液-液萃取柱放置在SS Rack 6-Ports For ProElut??60mL Cartridge (Cat.#: 4802)萃取裝置下層，萃取柱下方連接流量控制針頭，將大體積儲液器(Cat.#: 4812)放置在萃取裝置上層，儲液器下方連接可以控制流速的考克(Cat.#: 4806)，關閉考克，備用。
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將待凈化液3.1.2或3.2.2全部轉移至萃取柱中，當待凈化液全部流入萃取柱中，開始計時，向上層儲液器中加入70mL二氯甲烷，向待凈化液已轉移后的50mL塑料離心管中加入30mL二氯甲烷，充分潤洗離心管。萃取柱中液體吸附10min后，將潤洗液倒入萃取柱，待篩板上方潤洗液即將流干時，打開上層儲液器的考克，使二氯甲烷流入萃取柱，二氯甲烷在萃取柱上始終保持較高位置，繼續向儲液器中加入50mL二氯甲烷。萃取柱下方使用500mL蒸餾瓶收集全部二氯甲烷洗脫液，待洗脫液流至近干時，將蒸餾瓶取出，在35℃水浴下減壓蒸餾至約1mL，用丙酮洗滌蒸餾瓶數次，洗滌液全部轉移至5mL容量瓶中，用丙酮定容至刻度，混勻，上機分析。
色譜柱：DM-WAX 30m x 0.25mm x 0.25μm (Cat.#: 7521)
進樣口溫度：200℃
升溫程序：初始溫度150℃，保持1min，以10℃/min升溫至250℃，保持10min
載氣：氮氣，柱流速：2.0mL/min
進樣方式：分流進樣，分流比：30:1
進樣量：1.0μL
ECD：250℃
標準系列工作液：量取1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL、3.0mL、3.5mL、4.0mL及5.0mL 4-甲基咪唑標準儲備溶液1000μg/mL，分別置于10mL容量瓶中，用丙酮稀釋到刻度，混勻，制得濃度分別為100μg/mL、150μg/mL、200μg/mL、250μg/mL、300μg/mL、350μg/mL、400μg/mL及500μg/mL的4-甲基咪唑標準溶液。
將標準系列工作液分別注入氣相色譜儀中，測定相應物質的峰面積，以標準系列工作液中該物質的濃度為橫坐標，以該物質峰面積的響應值為縱坐標，繪制標準曲線。
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液體焦糖色和固體焦糖色中4-甲基咪唑檢測的添加回收結果。
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